本发明公开了一种细胞色素P450突变体及其应用,涉及基因工程和生物酶催化技术领域;本发明以已报道的LG-23作为突变模板,经过定点突变,改变酶与底物结合的活性口袋,得到一系列对石胆酸羟基化催化效果更高的突变体。在相同的催化条件下,本发明的突变体与模板LG-23相比,对石胆酸7β羟基化生成熊去氧胆酸的活性提高可达21倍,特异性可达到99%。