鸭干扰素因子7基因克隆及组织表达特异性分析

作者：邓志超; 章程; 罗沛; 詹晓芝; 江丹莉; 阳佑天; 刘文俊

来源：中国畜牧兽医, 2023, 50(07): 2606-2616.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.07.002

• 干扰素调节因子7(IRF7)
• 蛋白结构
• 亚细胞定位

【目的】构建樱桃谷鸭干扰素调节因子7(interferon regulatory factor 7,IRF7)基因CDS区序列的真核表达载体，分析IRF7蛋白结构和生物特性，检测不同组织内IRF7基因的表达水平，为进一步对鸭天然免疫系统开展研究奠定基础。【方法】利用RT-PCR扩增樱桃谷鸭IRF7基因的CDS区，构建真核表达质粒，利用Western blotting检测蛋白表达。使用荧光显微镜观察Poly(I∶C)对IRF7蛋白核移位的影响。对IRF7基因序列进行核苷酸相似性比对，构建系统进化树，并通过生物信息学方法在线分析预测IRF7蛋白的分子和结构特征。实时荧光定量PCR检测不同组织中IRF7基因的表达特异性。【结果】成功克隆樱桃谷鸭IRF7基因CDS区，长1 536 bp,共编码512个氨基酸，通过对重组质粒的真核表达，提取细胞总蛋白，Western blotting检测蛋白表达，结果显示重组蛋白大小约为110 ku。Poly(I∶C)处理鸭胚成纤维细胞促使pCMV-C-EGFP-IRF7的核内定位增加。核苷酸相似性结果显示，樱桃谷鸭与绿头鸭和鸡的IRF7基因核苷酸序列相似性分别为99.1%和80.8%,与非洲爪蛙的相似性仅为41.8%。系统进化树结果显示，樱桃谷鸭与绿头鸭和鸡亲缘关系最近，与非洲爪蛙亲缘关系最远。IRF7蛋白表现为结构不稳定的疏水性蛋白，主要由α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲构成。IRF7基因在各个组织内均有表达，在胆囊中表达量最高，在肺脏中表达量最低。【结论】樱桃谷鸭IRF7基因的CDS区序列大小为1 536 bp,编码512个氨基酸，IRF7蛋白为结构不稳定的疏水性蛋白，Poly(I∶C)刺激可引起IRF7发生核移位，该基因在不同组织表达差异较大。

• 单位
  仲恺农业工程学院; 佛山科学技术学院