马尔尼菲青霉氧化应激反应相关基因SKN7的克隆及功能研究

作者：袁锡华; 曹存巍; 刘伟; 李若瑜

来源：广西医科大学学报, 2011, 28(01): 38-41.

DOI：10.16190/j.cnki.45-1211/r.2011.01.003

• 马尔尼菲青霉
• 氧化应激反应
• SKN7
• 克隆
• 基因

目的:克隆双相真菌马尔尼菲青霉(PM)的氧化应激反应相关基因SKN7,并通过对酵母SKN7缺陷株的互补试验证明该基因是氧化应激反应相关基因。方法:提取PM标准株DNA及RNA后,通过简并PCR结合RACE技术克隆PM的SKN7基因;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)比较该基因在25℃及37℃温度下的表达;将该基因的cDNA插入酵母表达载体pY-ES2.0,转化酿酒酵母SKN7基因缺陷株,比较互补后酿酒酵母SKN7基因缺陷株对H2O2的抵抗能力是否增强。结果:PM的SKN7基因全长约2.5 kb,开放读码框为1 776 bp,推测编码592个氨基酸;包含4个内含子5个外显子及两个高度保守的结构域。该基因在双相温度表达量无变化,互补试验证明转化PM的SKN7基因后酿酒酵母SKN7基因缺陷株重新具有抵抗H2O2杀伤的能力。结论:PM的SKN7基因是氧化应激反应相关基因,但并不是酵母相特异表达基因。

• 单位
  北京大学第一医院; 广西医科大学第一附属医院