牛冠状病毒交叉引物扩增快速检测方法的建立

作者：唐豪; 贺泂杰^*

来源：中兽医医药杂志, 2023, 42(04): 31-97.

DOI：10.13823/j.cnki.jtcvm.2023.089

• 牛冠状病毒
• 交叉引物扩增
• 快速检测

牛冠状病毒(BCoV)引起犊牛腹泻，对养牛业造成极大危害。本研究采用交叉引物扩增(CPA)方法和核酸检测装置相结合，建立了BCoV的可视化快速检测方法。结果表明，CPA体系Mg2+最佳物质浓度为2.0 mmol/L，甜菜碱最佳物质浓度为0.4 mmol/L,d NTPs最佳物质浓度为0.6 mmol/L,Bst DNA聚合酶最佳浓度为1.5 U/μL,60℃为最佳反应温度，60 min为最佳反应时间。采用CPA BCoV-N反应体系同时检测沙门菌、大肠埃希菌、弯曲杆菌、牛冠状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒等犊牛腹泻相关病原，层析试纸条检测显示只有牛冠状病毒呈现检测线，未出现交叉反应。结果显示，CPA BCoV-N具有较高的特异性，CPA检测BCoV不需要昂贵的PCR仪器，简单的水浴或培养箱即可完成DNA扩增，封闭式核酸检测装置避免了气溶胶污染，对结果的判断更加直观客观，是一种简便、快速、灵敏的BCoV检测方法。

• 单位
  中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所; 甘肃省动物疫病预防控制中心