基于杆状病毒表达系统制备的诺如病毒GⅡ.17型病毒样颗粒体液免疫原性研究

作者：王文辉; 宫立孟; 万鑫; 郭靖; 孟胜利; 季雅琦; 王泽鋆^*; 申硕^*

来源：中国病毒病杂志, 2023, 13(05): 384-389.

DOI：10.16505/j.2095-0136.2023.5012

• 诺如病毒
• GⅡ. 17型
• 病毒样颗粒
• 单价疫苗
• 体液免疫

目的 初步评价基于杆状病毒表达系统制备的诺如病毒(Norovirus,No V) GⅡ.17型病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)的免疫原性。方法 制备并纯化No V GⅡ.17 VLPs，采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophroesis,SDS-PAGE)、免疫印迹法(Western blot)、透射电镜和粒径检测方法对其进行鉴定。GⅡ.17型VLPs采用肌内免疫途径，免疫Balb/C小鼠。研究Al(OH)3佐剂组4个免疫剂量(0.4、2、10、50μg)及不使用佐剂组3个剂量(0.4、2、10μg)的免疫应答。另外，设PBS、PBS加佐剂2个对照组。将每组的5只SPF级雌性健康Balb/c小鼠(6～8周龄)分别于0、3周进行初次免疫和加强免疫。于免疫前(第0天)，初次免疫后3周(第21天)，加强免疫后1周(第28天)、3周(第42天)分别眼眶采血。采用ELISA检测VLP-特异性Ig G抗体，组织血型抗原(histo-blood group antigen,HBGA)受体-VLPs结合阻断试验检测50%阻断滴度(50%of block‐ing titer,BT50)。组间特异性Ig G抗体水平和BT50水平进行对数转换后，采用Two-way ANOVA法进行统计学处理。结果 成功制备No V GⅡ.17 VLPs。经SDS-PAGE检测，No V GⅡ.17 VLPs纯度为95%,Western blot分析可见特异性条带，经透射电镜和粒径分析颗粒形态完整，粒径均一。2针肌内免疫后，疫苗不同剂量组(0.4、2、10μg)产生VLP-特异性Ig G抗体水平分别为4 222、67 559、135 118;BT50抗体水平分别为12.5、57.4、174.1,Al(OH)3作为佐剂的不同剂量组(0.4、2、10μg)产生VLP-特异性Ig G抗体水平分别为12 800、117 627、409 600;BT50抗体水平分别为19.0、100.0、229.7，抗体水平明显高于无佐剂组(P均<0.05)。结论 Al(OH)3佐剂具有显著的免疫增强作用，肌内注射作为免疫途径，2针免疫，剂量高于2μg可产生较高的抗体Ig G和BT50水平。应用含铝佐剂的GⅡ.17型VLPs免疫小鼠，诱生了较好的HBGA受体结合阻断抗体，可作为诺如病毒疫苗的组分抗原。

• 单位
  武汉生物制品研究所有限责任公司; 武汉药品医疗器械检验所