自噬抑制剂3-MA上调H2O2损伤的PC12细胞氧化应激水平

作者：秦东旭; 肖燕; 王力波; 艾立瑶; 宋英^*

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2019, 35(05): 528-534.

DOI：10.13865/j.cnki.cjbmb.2019.05.09

• PC12细胞
• 细胞凋亡
• 过氧化氢
• 抗氧化酶
• 6-氨基-3-甲基腺嘌呤
• LC3-II/LC3-I

为探究自噬抑制剂6-氨基-3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对损伤细胞氧化应激水平的影响,将3-MA作用于H2O2诱导的PC12细胞损伤模型,以自噬增强剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)作为对照,探讨自噬与氧化应激的关系。测定线粒体的膜电位和细胞内的活性氧(reactive oxygen species,ROS)与丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性,评价损伤细胞的氧化应激状态。单丹(磺)酰戊二胺(monodansylcadaverine,MDC)染色,观察损伤细胞的自噬情况。蛋白质印迹分析损伤细胞中的自噬相关蛋白质LC3-II/LC3-I比值变化。实验结果显示:与正常组相比,H2O2损伤细胞的ROS水平上升到正常组的141%,MDA含量增加(P<0. 001); CAT与SOD酶活力显著降低(P<0. 001),差异均有统计学意义,证明损伤细胞氧化应激水平增加; MDC染色结果表明,H2O2组自噬明显增加。Western印迹结果表明,LC3-II/LC3-I值显著升高(P<0. 05);与损伤组相比,3-MA组MDC染色结果表明,自噬水平降低。Western印迹结果表明,LC3-II/LC3-I值下降;细胞内ROS水平升高,增加到正常组的208%。MDA含量增加(P<0. 001),CAT、SOD酶活力降低(P<0. 001)。综上结果表明,自噬抑制剂可增加H2O2诱导的PC12细胞损伤模型的氧化应激水平,增加细胞凋亡。

• 单位
  浙江工业大学