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摘要
目的：构建携带JAK2-V617F,MPLW515L及CALR-Type I基因突变的骨髓增殖性肿瘤（MPN）移植小鼠模型，并建立移植小鼠模型构建成功的评价体系。方法：获取小鼠骨髓c-kit+细胞：颈椎脱位处死小鼠，分离股骨、胫骨及髂骨，收集骨髓细胞，经过CD117磁珠孵育，分选出c-kit+细胞。构建小鼠原代突变细胞：利用逆转录病毒体系构建GFP标记的基因突变载体，将带有基因突变的逆转录病毒载体经Platinum-E细胞包装后，获取病毒上清，感染小鼠的骨髓c-kit+细胞。构建MPN移植小鼠模型：收集感染后含有突变基因的小鼠原代c-kit+细胞，再经尾静脉植入经致死剂量（8.0 Gy）γ射线照射的同种雌性受鼠体内。评价MPN移植小鼠模型：移植后定期通过尾静脉采血检测小鼠外周血血象变化；观察小鼠脾脏大小及骨髓纤维化的程度。结果：成功获得携带突变基因的小鼠骨髓c-kit+细胞。成功构建MPN移植小鼠：移植小鼠外周血细胞中携带外源植入的GFP阳性细胞，且白细胞（WBC）、血小板（PLT）以及红细胞压积（HCT）均升高；移植小鼠重量减轻、饮水量与摄食量减少；病理分析显示移植小鼠脾脏肿大，并伴有骨髓纤维化，提示MPN模型构建成功。根据MPN模型建立过程中3种移植小鼠表现出的共性和异性，归纳总结出可以作为判定MPN模型构建成功的一个初步评价体系，主要包括以下指标：小鼠外周血GFP阳性细胞比例；WBC、PLT及HCT计数；脾脏肿大程度及骨髓纤维化程度。结论：成功建立JAK2-V617F、MPLW515L及CALR-Type I逆转录病毒介导的MPN小鼠模型，可为针对MPN发病机制及药物靶向治疗的研究提供重要的实验动物模型。
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