基于复合细胞模型的顺式和反式二苯乙烯苷特异质肝损伤评价

作者：潘韵铮; 李庆菊; 张琦; 蒋宝平; 张良; 许立^*

来源：药学学报, 2021, 56(03): 808-815.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2020-1741

• 特异质型药物性肝损伤
• 何首乌
• 二苯乙烯苷
• NLRP3炎症小体
• 评价模型

本研究从免疫炎症角度建立一种体外评价特异质型药物性肝损伤(idiosyncratic drug-induced liver injury,IDILI)的复合细胞模型,并应用此模型对顺式二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxy-cis-stilbene-2-O-β-glucoside, Cis-SG)和反式二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxy-trans-stilbene-2-O-β-glucoside,Trans-SG)的IDILI风险进行评价。CellTiter-Glo?3D Cell Viability Assay法测定Cis-SG和Trans-SG对三维(three-dimension, 3D)培养下HepG2细胞活力的影响;MTT法测定Cis-SG和Trans-SG对THP-1巨噬细胞活力的影响,确定低、中、高给药剂量。分别给予THP-1巨噬细胞1、5和25μmol·L-1的Cis-SG和Trans-SG或其经3D HepG2细胞孵育的上清液,酶联免疫吸附分析(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测THP-1巨噬细胞上清液中白细胞介素(interleukin, IL)-1β的水平;免疫印迹(Western blot)法和逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)分别检测THP-1巨噬细胞中凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein, ASC)、Nod样受体蛋白3 (Nod-like receptor protein 3, NLRP3)炎症小体、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1 (cysteinyl aspartate specific proteinase-1, caspase-1)和IL-1β的表达。结果显示, 1、5和25μmol·L-1的Cis-SG和Trans-SG对THP-1巨噬细胞分泌IL-1β的水平无明显影响,而1、5和25μmol·L-1的Cis-SG和25μmol·L-1的Trans-SG经肝细胞孵育后的上清液能显著提高THP-1巨噬细胞分泌IL-1β的水平,并能明显提高ASC、NLRP3、caspase-1和IL-1β蛋白和mRNA的表达。综上,本研究建立的体外IDILI复合细胞评价模型在测试Cis-SG和Trans-SG上成功应用,此模型有助于在体外初步评价和筛选具有IDILI风险的药物,为药物的特异质肝毒性预测与解决提供方法。

• 单位
  南京中医药大学