应用抑制消减杂交克隆支气管哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因

作者：徐劲松; 蔡绍曦; 邹飞; 佟万成; 赵海金

来源：第一军医大学学报, 2004, 24(05): 509-512.

DOI：10.3321/j.issn:1673-4254.2004.05.006

• 支气管哮喘
• 嗜酸细胞
• 抑制消减杂交
• 差异表达基因 bronchial asthma
• eosinophil
• suppression subtractive hybridization
• differentially expressed gene

目的探讨嗜酸细胞在支气管哮喘发病中的分子机制。方法提取1名哮喘发作病人嗜酸细胞总RNA为实验子,治疗后作为对照的嗜酸细胞的RNA为驱动子。检测子、驱动子的总RNA由SMART cDNA合成方法合成双链cDNA,进而由抑制消减杂交方法获得消减杂交产物。消减杂交产物克隆到T载体建立消减文库,对部分克隆进行杂交筛选及序列比对。结果消减杂交文库挑取400个克隆进行PCR扩增,阳性率约为80%。部分阳性克隆经2轮杂交筛选及序列对比后获得6个差异片段,涉及与编码炎症介质、细胞信号传导、能量代谢和细胞凋亡相关的基因。结论抑制消减杂交技术有效地克隆了支气管哮喘发作期和缓解期嗜酸细胞差异表达的基因,为阐明嗜酸细...

• 单位
  第一军医大学南方医院