猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及反应原性分析

作者：欧云文; 马小元; 王俊; 丁耀忠; 张永光; 张杰

来源：动物医学进展, 2017, 38(04): 1-6.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2017.04.001

• 猪圆环病毒2型
• ORF2基因
• 原核表达
• 反应原性

研究猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的抗原性,为开发PCV2的检测方法奠定基础。以PCV2CAU0673毒株的DNA为模板,扩增获得702bp的目的片段,扩增产物克隆入pET30a(+)原核表达载体,构建pET30a-PCV2-ORF2重组质粒,转入大肠埃希菌BL21(DE3);在37℃以1mmol/L IPTG诱导表达6h;采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,并用不同浓度的尿素对纯化蛋白进行复性。SDSPAGE分析表明,该ORF2编码基因在大肠埃希菌中得到表达,蛋白大小约为34ku;Western blot检测结果表明,该重组Cap蛋白与PCV2阳性血清发生特异性反应,与NA-PRRSV和PPV1血清不发生交叉反应。成功构建了PCV2-ORF2原核表达载体,实现了在大肠埃希菌中的表达,纯化后的复性蛋白具有较好的反应原性,为猪圆环病毒2型检测方法建立或试剂盒的开发奠定了基础。

• 单位
  甘肃农业大学; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所