应用慢病毒shRNA文库结合二代测序筛选口腔鳞癌放疗抵抗相关分子

作者：罗丽萍; 曹邦荣; 马士淇; 任源; 祁国海; 王卫东^*

来源：中华放射医学与防护杂志, 2021, 41(03): 166-171.

• 慢病毒
• 短发夹核糖核酸
• 口腔鳞癌
• 放疗
• 二代测序

目的用高通量方法筛选口腔鳞癌放疗抵抗相关的激酶基因, 为口腔鳞癌的临床治疗决策提供理论基础。方法以慢病毒构建的短发夹核糖核酸(shRNA)激酶文库(含4 675个不同shRNA序列, 覆盖709个人激酶基因)感染舌鳞癌Cal-27细胞, 嘌呤霉素筛选去除未成功感染的细胞后, 以光子射线进行照射(0、10和15 cGy), 然后继续培养3 d, 以增加不同射线抗性细胞的丰度差异。提取细胞基因组DNA, 利用PCR获得完整shRNA序列, 同时每组引入不同标签序列, 利用illumina平台进行二代测序, 找出丰度发生显著变化的shRNA, 其对应基因即为影响射线抗性的基因。结果本次实验共筛选到5个影响口腔鳞癌放射线抗性的激酶基因, 其中, PKLR和IPMK敲减后会增加射线抵抗, AURKB、ITPKB和DLG2敲减后会导致放射敏感, 其高表达会导致患者对放疗耐受。结论本研究利用shRNA慢病毒文库结合二代测序方法筛选到3个口腔鳞癌放射抵抗基因, 但具体作用机制尚需进一步探究。

• 单位
  四川省肿瘤医院