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摘要
为探究多杀性巴氏杆菌(Pm)胞外分泌蛋白的DNase活性及对该蛋白DNase活性影响的因素，本研究经琼脂培养法以λDNA为底物鉴定禽Pm C48-1株胞外蛋白的DNase活性，将Pm培养5 h后采用低温透析法收集禽Pm C48-1株的胞外分泌蛋白，并采用BCA试剂盒测定其浓度，进一步利用Kunitz法检测Pm胞外分泌蛋白的DNase活性。结果显示，禽Pm分泌的胞外蛋白能够降解λDNA，即其有DNase活性，且获得的胞外分泌蛋白的浓度为1.32μg/mL，其降解λDNA的活性水平为6.07×106Kunitz Unit/mg。利用琼脂糖凝胶电泳法检测胞外分泌蛋白降解不同底物DNA的能力以及酸碱、温度和不同浓度金属阳离子对胞外分泌蛋白降解λDNA活性的影响。结果显示，Pm胞外分泌蛋白的DNase活性具有广谱性，可降解λDNA、细菌基因组DNA、质粒DNA和PCR扩增的DNA片段。DNase活性影响因素的检测结果显示，Pm胞外分泌蛋白降解λDNA的最适温度为30℃，在pH7.0～pH9.0时该蛋白的DNase活性较好，而在酸性和强碱性时该蛋白则无DNase活性。不同浓度的Na+、K+和Ba2+对胞外分泌蛋白的DNase活性均无明显影响；不同浓度的Ca2+、Mg2+和Mn2+可提高胞外分泌蛋白的DNase活性；1 mmol/L和5 mmol/L的Co2+以及0.01 mmol/L和0.1 mmol/L的Cu2+则可抑制该蛋白的DNase活性，而1 mmol/L和5 mmol/L的Cu2+则对该蛋白的DNase活性无明显影响。本研究首次证实了禽Pm C48-1株胞外分泌蛋白的DNase活性，且该活性具有广谱性，并明确了影响该活性的因素，为进一步探究胞外DNase在Pm感染及与宿主互作中的作用提供参考。
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单位动物科技学院; 河南科技大学
