猪链球菌2型Ⅳ型分泌系统组分VirD4与毒力相关性分析

作者：王俊平; 郑玉玲; 骈亚亚; 郭洁; 郝淮杰; 姜永强

来源：微生物学报, 2015, 55(05): 643-649.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.20140388

• 猪链球菌2型
• 89 K毒力岛
• Ⅳ型分泌系统
• 毒力

【目的】构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33毒力岛89 K上的Ⅳ型分泌系统组分Vir D4敲除突变株,初步分析其活性和毒力,为进一步研究猪链球菌2型在逃避宿主天然免疫杀伤中的作用提供基础。【方法】以05ZYH33基因组为模板,PCR扩增Vir D4基因上下游同源臂,以穿梭质粒p SET1为模板,PCR扩增氯霉素抗性基因Cm,通过重叠PCR技术搭建上述3个片段并连接至温敏载体p SET4s,构建基因敲除载体p SET4s∷Vir D4;通过同源重组构建基因敲除突变株ΔVir D4;通过体外全血杀伤实验、CD1小鼠竞争感染及攻毒实验对突变株和野生株的毒力进行比较分析。【结果】获得了基因敲除突变株ΔVir D4,通过对比发现其毒力与野生株相比有所降低。【结论】猪链球菌2型Ⅳ型分泌系统组分Vir D4与其毒力相关,并在早期抵抗天然免疫细胞杀伤中发挥一定作用。

• 单位
  军事医学科学院; 中国科学院微生物研究所; 病原微生物生物安全国家重点实验室