hERG shRNA表达载体构建及其稳定转染骨肉瘤细胞系MG-63、SOSP-9607的建立

作者：贠喆; 马云雷; 张涛; 蔡承魁; 韩康; 杨彤涛; 庞炜; 周勇

来源：现代生物医学进展, 2012, (11): 2031-2034.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2012.11.038

• hERG
• 钾离子通道
• 骨肉瘤
• shRNA
• 载体构建 hERG
• Potassium channel
• Osteosarcoma
• shRNA
• Vector construction

目的:构建hERG钾离子通道蛋白(human ether-a-go-go-related gene potassium channel)shRNA表达载体质粒,获得稳定转染干扰质粒的人骨肉瘤细胞系MG-63、SOSP-9607。方法:将4对合成的寡核苷酸链退火形成双链,连接入pGPU6/GFP/Neo表达载体,并测序鉴定。使用脂质体法将重组的质粒转染至MG-63、SOSP-9607,通过G418筛选建立稳定转染的两种细胞系,采用免疫印迹(Western blot)技术检测hERG蛋白的表达。结果:测序结果证实shRNA与载体连接正确,免疫印迹实验证实hERG蛋白表达显著降低。结论:成功构建了h...

• 单位
  第四军医大学