瘤背石磺低频听力基因PMCA2的克隆、相对表达及神经组织原位杂交分析

作者：黄笑含; 贾晶晶; 杨铁柱; 沈和定^*; 赵枫燊; 李称奇

来源：基因组学与应用生物学, 2021, 40(04): 1452-1462.

DOI：10.13417/j.gab.040.001452

• 瘤背石磺
• PMCA2
• RACE
• 荧光定量
• 原位杂交

低频听力基因PMCA2在生物听力方面占据着重要位置,基因突变或缺失后会引发神经性耳聋和平衡功能障碍。为探究基因PMCA2在瘤背石磺潮汐感知中的作用,本研究通过RACE技术克隆得到瘤背石磺PMCA2基因的全长cDNA,并进行系统进化分析。利用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)技术和原位杂交技术分析两组(暂养无处理组和潮汐干扰刺激组)瘤背石磺PMCA2基因在各组织中相对表达量和在神经组织各神经节中的相对表达部位。实验结果表明,瘤背石磺PMCA2基因cDNA全长5 091 bp,包含492 bp的5’非编码区(UTR)以及972 bp的3’UTR,3 627 bp的开放阅读框,共编码1 208个氨基酸,基因序列较为保守。序列分析结果显示,瘤背石磺与加州海兔、绿色海蜗牛和福寿螺PMCA2氨基酸序列同源性分别为81.79%,78.25%和72.91%。通过系统进化树分析研究得出,瘤背石磺与加州海兔进化关系相对较近。RT-qPCR结果显示,两组石磺神经组织PMCA2基因表达量皆高于其他组织的,且潮汐干扰刺激组神经组织表达量明显高于暂养无处理组,有显著性差异。两组瘤背石磺神经组织原位杂交实验结果显示,相较于暂养无处理组,潮汐干扰刺激组石磺神经组织杂交信号明显增强,该结果与荧光定量PCR结果相符。实验初步表述了瘤背石磺PMCA2基因的生物信息学特征,在瘤背石磺各组织中的表达情况及在神经组织中的分布部位,为研究滩涂生物感知潮汐能力提供原创性成果。

• 单位
  上海海洋大学