当归补血汤通过miR-27a/TGF-β1/Smad3通路抑制HK-2细胞纤维化作用及机制研究

作者：赵烨; 葛凡; 李子航; 朱景天; 薛梅^*

来源：南京中医药大学学报(自然科学版), 2022, 38(07): 592-598.

DOI：10.14148/j.issn.1672-0482.2022.0592

• 当归补血汤
• HK-2
• miR-27a
• TGF-β1/Smad3
• 纤维化

目的 探讨当归补血汤通过miR-27a调控HK-2细胞纤维化的机制。方法 HK-2细胞分为对照组、高糖组、高糖+空白血清组、高糖+当归补血汤含药血清组。采用MTT法检测各组细胞增殖情况；采用Western blot法检测纤维化相关因子波形蛋白(Vimentin)、Ⅳ型胶原(COLⅣ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p-Smad3/Smad3和转化生长因子(TGF)-β1蛋白的表达情况；qPCR法检测miR-27a及纤维化相关因子mRNA的表达情况；通过转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA并向培养基中加入TGF-β1,观察miR-27a的表达和纤维化相关蛋白表达的情况。结果 MTT结果显示，与对照组相比，高糖组细胞增殖率明显降低(P<0.05,P<0.001),当归补血汤含药血清作用24、48 h后细胞增殖率明显提高(P<0.05,P<0.001)。Western blot结果显示，当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞纤维化相关蛋白COLⅣ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3的表达(P<0.05,P<0.01)。qPCR结果显示，当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞COLⅣ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1 mRNA和miR-27a的表达(P<0.05,P<0.01)。TGF-β1处理细胞后，细胞纤维化加重，miR-27a的表达升高(P<0.05,P<0.01),当归补血汤含药血清可明显降低TGF-β1诱导的纤维化细胞中miR-27a的表达升高(P<0.001)。转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA可明显降低TGF-β1诱导的细胞纤维化蛋白COLⅣ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3表达的升高(P<0.05,P<0.01)。结论 当归补血汤含药血清可促进HK-2细胞增殖，并通过miR-27a/TGF-β1/Smad3信号通路调控HK-2细胞纤维化。

• 单位
  南京中医药大学