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摘要
目的探讨周期性张应力(CTS)联合淫羊藿苷促进脂肪干细胞(ASCs)成骨分化的作用。方法分离10只Sprague-Dawley(SD)大鼠的ASCs,分别按不同的干预方法将收集的ASCs细胞分为对照组(仅用普通培养基干预)、淫羊藿苷组(仅用淫羊藿苷干预)、1000μ组(仅用1000μ的CTS干预)、2000μ组(仅用2000μ的CTS干预)、3000μ组(仅用3000μ的CTS干预)和联合干预组(用2000μ的CTS联合淫羊藿苷进行干预)。淫羊藿苷的作用浓度为10-7mol/L;CTS的设置参数为频率1.0 Hz,应力大小分别为1000μstrain(简称1000μ)、2000μ、3000μ,每刺激5 s之后休息15 s,每日总刺激时间为2 h。干预7 d后,收获细胞采用Western Blot法检测碱性磷酸酶(ALP)蛋白的表达;用淫羊藿苷联合2000μ的CTS对ASCs进行干预3 d后,收获ASCs细胞用Western Blot法检测其Runt相关基因转录因子2(Runx2)、YES相关蛋白(YAP)和结缔组织生长因子(CTGF)蛋白的表达;分别于干预3 d和7 d后,采用ALP活性定量检测试剂盒对ALP活性进行检测;干预3 d后,利用RT-PCR检测YAP下游靶基因CTGF和锚蛋白重复结构域1(Ankrd1)的表达;干预7 d后,利用RT-PCR检测成骨分化相关基因骨桥素(OPN)和Ⅰ型胶原的表达,并对各组所得数据进行统计学分析比较。结果淫羊藿苷和CTS(1000μ、2000μ、3000μ)均能显著促进ALP蛋白的表达。与1000μ和3000μ应力大小的CTS相比,2000μ的CTS具有最强的促ALP蛋白表达能力;且2000μ的CTS联合淫羊藿苷能显著促进ALP的表达及Runx2和CTGF的表达,且其联合作用时效应更明显;但淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用并不能促进YAP蛋白的表达,只有联合作用时才具有促YAP表达作用。淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用3 d和7 d后均能显著上调ALP的活性,且其联合作用时上调ALP活性的效应更加明显。淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用7 d后,能显著促进成骨分化基因OPN和Ⅰ型胶原蛋白的表达,且联合作用时效应更明显。淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用3 d后能显著促进YAP靶基因CTGF和Ankrd1的表达,联合作用时效应更明显。结论 CTS和淫羊藿苷联合作用可以通过上调YAP活性来促进ASCs的成骨分化。
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