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摘要
胰岛素样生长因子1 (insulin like growth factor 1, IGF1)是一类单链多肽类激素,在动物机体内可促进胚胎的发育和细胞增殖分化,对提升动物繁殖性能有重要作用。饲喂0.07%N-乙酰半胱氨酸(Nacetylcysteine, NAC)可提高努比亚山羊(Capra hircus)(Nubian ibex)的产羔率且效果最好,并在山羊子宫角进行转录组测序的基础上筛选出差异显著基因IGF1,采集了努比亚山羊子宫、输卵管、垂体、下丘脑、卵巢组织并提取RNA,运用qRT-PCR对其转录组测序结果进行验证。同时克隆努比亚山羊IGF1基因CDS区,进行生物信息学分析;构建IGF1基因真核表达载体,转染至子宫上皮细胞,qRT-PCR检测努比亚山羊繁殖性状相关基因同源框基因A10 (homeobox A10, HOXA10)、白血病抑制因子(interleukin 6 family cytokine, LIF)、趋化因子14 (C-X-C motif chemokine ligand 14, CXCL14)的表达水平。结果表明:IGF1基因在被检测的5个组织中均有表达,实验组子宫、输卵管、下丘脑、卵巢中的表达量极显著高于空白组(P<0.01)。克隆所得努比亚山羊IGF1基因CDS区为471 bp,编码153个氨基酸;蛋白预测结果显示:努比亚山羊IGF1蛋白的分子式为C739H1178N212O215S15,相对分子质量为16.953 67 kD,等电点为9.36。遗传进化树分析表明,努比亚山羊IGF1基因与绵羊(Ovis aries)的遗传距离最近;qRT-PCR结果显示,转染重组质粒成功组细胞IGF1基因mRNA的表达水平极显著高于空白对照组细胞(P<0.01),转染重组质粒成功组细胞HOXA10、LIF、CXCL14基因的mRNA表达水平均显著高于空白对照组(P<0.05)。说明超表达IGF1基因可促进产羔相关基因HOXA10、LIF、CXCL14基因的表达。本研究成功构建pEGFP-N3-IGF1真核表达载体,检测IGF1基因对努比亚山羊繁殖相关基因的表达影响,为进一步研究IGF1基因对努比亚山羊繁殖性状的影响提供基础资料。
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单位动物科学学院; 贵州大学
