NDY1 shRNA真核表达质粒构建及其在卵巢癌A2780细胞中的稳定表达

作者：卢芳芳; 况燕; 徐朝欢; 王旗; 李美仪

来源：重庆医学, 2016, 45(08): 1012-1015.

• 卵巢肿瘤
• NDY1
• 质粒构建
• A2780细胞

目的构建NDY1shRNA真核表达载体,并获得稳定表达shNDY1质粒的卵巢癌A2780细胞。方法根据GenBank数据库提供的NDY1基因核苷酸序列,设计并合成靶向干扰NDY1基因的小发夹RNA(shRNA)序列,插入表达载体获得重组质粒pGPU6/GFP/Neo-shNDY1。重组质粒测序鉴定正确后,脂质体介导转染A2780细胞,经G418筛选及有限稀释法获得稳定转染细胞,采用实时定量聚合酶链反应法(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法分别检测A2780稳定转染细胞NDY1mRNA及蛋白表达。结果重组质粒测序正确,转染shNDY1后,A2780细胞mRNA及蛋白表达水平分别下降(72.89±4.83)%及(55.85±4.84)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建pGPU6/GFP/Neo-shNDY1真核表达质粒,并获得shNDY1稳定转染的卵巢癌A2780细胞,为细胞水平研究NDY1与卵巢癌的关系奠定实验基础。

• 单位
  广西医科大学第一附属医院