破骨细胞建模方法的探索

作者：杨一秋; 李兰; 解继胜^*

来源：右江民族医学院学报, 2021, 43(03): 306-309.

• RAW264.7细胞
• 破骨细胞
• NFATc1
• TRAP
• MMP-9

目的探索RAW264.7细胞向破骨细胞分化的最佳条件,为后续的实验研究提供一个可靠的破骨细胞建模方式。方法将RAW264.7细胞以每孔2×104个、每孔3×103个分别接种到6孔板、24孔板中,待贴壁24h后更换为含20ng/ml的巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、50ng/ml的核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的诱导液诱导培养,每隔2d换液一次,待镜下观察到较多破骨细胞时进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并利用实时荧光定量PCR检测活化T-细胞核因子1(NFATc1)、TRAP、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的mRNA表达水平。结果经过诱导培养3d时破骨细胞开始聚集生长,出现多个核,但整体阳性破骨细胞不是太多,待诱导至4～6d时,可见到较大面积的破骨细胞,细胞核增多达数十个,细胞质也非常丰富;与对照组相比,诱导组NFATc1、TRAP、MMP-9的mRNA表达水平上调。NFATc1、MMP-9与对照组的差异有统计学意义(P <0.05),但是TRAP与对照组的差异没有统计学意义。结论 RAW264.7细胞在20ng/ml的M-CSF、50ng/ml的RANKL这两种细胞因子存在的条件下经过4～6d培养可以被诱导为破骨细胞。

• 单位
  右江民族医学院; 基础医学院