固相烷基化:一种低损失、抗干扰的微量样品蛋白质组制备新策略（英文）

作者：李一岚; 袁辉明^*; 程孟春; 朱旭东; 杨开广; 张玮杰; 随志刚; 张春玉^*; 张丽华^*; 张玉奎

来源：Science Bulletin, 2022, 67(16): 1628-1631.

微量样品蛋白质组深度覆盖分析对于生命科学和临床医学研究具有重要意义.然而,现有微量样品制备方法仍存在抗干扰能力差、回收率低和处理时间长等问题,影响了微量样品蛋白质组分析的覆盖度、精准度和通量.为了解决上述问题,本文提出了基于固相烷基化的微量样品蛋白质组制备新方法.采用该方法,细胞或体液样品中的蛋白质可以通过巯基共价反应固定到碘乙酸修饰的硅球表面,而材料表面非特异性吸附的干扰物,如表面活性剂、聚合物、高盐等可以通过甲醇、碳酸氢铵等溶剂清洗快速去除.最终,固定在材料表面上的蛋白质通过双酶酶切进行高效原位酶解.整个样品制备可在～3 h内完成.该方法对于分析复杂基体下的微量样品具有明显优势,可从10～1000个HeLa细胞中平均鉴定到277～1603个(n=3)蛋白质,是文献报道SP3方法的1.4～6.4倍.此外,基于该方法,还建立了基于96孔板的高通量临床样品制备流程,可将单个样品的平均处理时间进一步缩短至10 min,定量变异系数降低至12%,显著提高了微量临床样品蛋白质组定量分析的通量和精准度,为生物学和临床应用提供了重要工具.

• 单位
  中国科学院; 中山大学; 中国科学院大学