摘要
目的 探讨淫羊藿苷(ICA)优化大鼠脂肪干细胞(rASCs)促进超长随意皮瓣存活的作用及机制。方法 选择6周龄雌性健康无特定病原体(SPF)级SD大鼠作为实验动物。提取rASCs并鉴定其多向分化能力及表面标志物。通过蛋白免疫印迹(WB)实验检测不同浓度ICA(0、0.1、1、10μM)对rASCs中血管生成因子[血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)、成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)、胰岛素样生长因子-2(IGF-2)]表达的影响。设置rASCs组(予未处理的rASCs)、ICA+rASCs组(予1μM ICA预处理的rASCs)及空白对照组(予等体积PBS),每组3只大鼠,根据分组在皮瓣蒂部注射相应细胞悬液。于治疗后7、14、28 d评估皮瓣存活情况。治疗后28 d取皮瓣组织行组织学及WB实验,检测组织中微血管密度(MVD)、胶原含量及各血管生成因子的表达情况。结果 rASCs具有成脂、成骨和成软骨分化的能力,CD29及CD44呈高表达,不表达CD45。WB结果提示ICA处理能显著提高rASCs中血管生成因子的表达(P<0.05)。动物实验结果显示,与空白对照组比较,rASCs组及ICA+rASCs组治疗后7 d、14 d的皮瓣存活面积比更高(P<0.05);在治疗后28 d,仅ICA+rASCs组的皮瓣存活面积比显著高于空白对照组(P<0.05)。组织学实验结果显示,与空白对照组相比,rASCs组和ICA+rASCs组的皮瓣组织结构排列更为紧密,MVD、胶原含量显著提高(P<0.05)。WB结果显示,rASCs组和ICA+rASCs组的VEGF、PDGF-BB和FGF-2蛋白表达水平均显著高于空白对照组(P<0.05),且ICA+rASCs组的VEGF、PDGF-BB蛋白表达水平较rASCs组更高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ICA能够提高rASCs血管生成因子的表达水平,这可能是其优化rASCs促进大鼠超长随意皮瓣存活的机制。
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