人溶血磷脂酸受体1基因的克隆、表达载体构建及瞬时转染293T细胞

作者：李铁威; 赵鹏飞; 马洁; 阿拉坦高勒

来源：生物技术通报, 2013, (08): 170-175.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2013.08.025

• LPAR1
• 基因克隆
• 转基因细胞模型
• cAMP应答 LPAR1 Gene cloning Transgenic cell model cAMP response

从人胃癌细胞中提取RNA然后反转录成cDNA,进而PCR克隆LPAR1(Lysophosphatidic Acid Receptor1)基因,亚克隆到pCR2.1载体,通过测序、酶切、连接到表达载体pIRES2-EGFP,通过酶切、测序鉴定获得pIRES2-EGFP-LPAR1重组质粒;表达载体以Lipofectamine2000介导转染293T细胞。用Real-time PCR法检测外源基因在293T细胞中表达,并通过ELISA检测LPAR1的活性。结果表明,克隆到LPAR1基因并获得了pIRES2-EGFP-LPAR1表达载体,在293T细胞中确认到LPAR1基因的过量表达,并通过LPAR...

• 单位
  内蒙古大学