c-Myc蛋白与DNA-PKcs作用位点的鉴定

作者：尚增甫; 徐勤枝; 安静; 王豫; 周平坤

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2009, 25(01): 30-36.

• DNA-依赖蛋白激酶催化亚基
• c-Myc
• 蛋白质相互作用
• 蛋白稳定性

DNA-PK复合物由Ku蛋白和DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)组成,DNA-PKcs属于PI3K相关激酶家族成员.我们前期工作发现,DNA-PKcs沉默后,c-Myc的稳定性下降,且二者存在相互作用.为进一步确定c-Myc蛋白与DNA-PKcs相互作用位点,本研究利用原核表达系统活动了c-Myc及其截短体蛋白,利用GSTpull-down技术结合Western印迹法,发现c-Myc蛋白294~370位氨基酸与DNA-PKcs存在相互作用.在细胞内表达GFP-c-Myc各截短体蛋白,发现294~370位氨基酸是c-Myc蛋白降解必需的.利用免疫荧光技术,发现DNA-PKcs与c-Myc蛋白有相同的细胞亚定位,进一步表明两者在生物学功能上具有相关性.有文献报道294~370位氨基酸是乙酰转移酶p300的底物,此位点的乙酰化导致c-Myc的降解.本实验结果提示,c-Myc蛋白的294~370位氨基酸与DNA-PKcs结合,可能阻止了乙酰转移酶p300的结合,从而达到提高c-Myc蛋白稳定性的作用.

• 单位
  军事医学科学院放射与辐射医学研究所