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摘要
目的:探究牛膝醇提物对实验兔膝骨关节炎(OA)模型AMPK/Wnt/MAPK信号通路串话的影响。方法:将64只实验兔按照随机数字表法分为造模组50只、空白对照组(未造模)14只,造模6周后,从造模组和空白对照组各随机取2只实验兔进行OA模型验证;造模成功后,将造模组48只实验兔随机分为模型对照组、牛膝醇提物低剂量组、牛膝醇提物中剂量组、牛膝醇提物高剂量组,每组12只。各组连续灌胃给药6周后,HE染色法观察软骨组织及病理学改良Mankin’s评分;免疫组化检测膝关节软骨AMPK、ERK、JNK、p38、COX-2、β-Catenin蛋白表达变化;Western blotting检测关节软骨AMPK、ERK、JNK、p38、COX-2、β-Catenin蛋白表达情况。根据https://string-db.org/蛋白互作网址预测牛膝醇提物对AMPK/Wnt/MAPK信号通路关键蛋白互作网络机制图。结果:HE染色提示模型对照组血管入侵潮线结构、软骨细胞数量明显减少,软骨细胞排列纹理、基质染色变浅,牛膝醇提物低、中、高剂量组局部软骨表面可见不规则裂隙,达钙化层,软骨细胞数量增多,基质染色呈浅红色,潮线结构稍正常。病理学改良Mankin’s评分显示,模型对照组改良Mankin’s评分高于空白对照组(P<0.01),牛膝醇提物低、中、高剂量改良Mankin’s评分低于模型对照组(P<0.05)。免疫组化和Western blotting检测显示,模型对照组兔膝关节软骨ERK、JNK、p38、COX-2、β-Catenin蛋白表达明显高于空白对照组(P<0.05),AMPK蛋白表达与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);牛膝醇提物低、中、高剂量组兔膝关节软骨ERK、JNK、p38、COX-2、β-Catenin蛋白表达明显低于模型对照组(P<0.05);牛膝醇提物高剂量组兔膝关节软骨AMPK蛋白表达明显高于模型对照组(P<0.05),牛膝醇提物低、中剂量组兔膝关节软骨AMPK蛋白表达与模型组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。String蛋白互作预测图显示Akt家族蛋白节点最多,Mapk家族蛋白节点次之。结论:牛膝醇提物能改善兔膝骨关节炎模型病理评分,其中牛膝醇提物高剂量组能有效上调AMPK蛋白表达,下调ERK、JNK、p38、COX-2、β-Catenin蛋白表达;Akt家族蛋白、Mapk家族蛋白在牛膝醇提物对AMPK/Wnt/MAPK信号通路网络互作之间的联系起到了关键桥接蛋白作用,其作用机理有待进一步研究。
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