过表达RIPK3对SH-SY5Y细胞CX3CL1基因表达的影响

作者：张国禄; 程世翔; 徐忠伟; 衣泰龙; 廖吉连; 涂悦; 张赛

来源：武警后勤学院学报(医学版), 2016, 25(03): 169-173.

DOI：10.16548/j.2095-3720.2016.03.001

• 受体相互作用蛋白激酶-3
• CX3CL1基因
• 神经母细胞瘤

【目的】建立受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)过表达的人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y细胞模型,筛选表达水平受到RIPK3影响的基因,以探讨RIPK3在神经系统中可能具有的生物学效应。【方法】采用分子克隆的方式在实验组SH-SY5Y细胞内上调RIPK3的表达水平。激光共聚焦显微镜下观察GFP蛋白的表达情况确认转染结果;以Western blotting确认RIPK3表达变化。通过MTT实验中细胞增值活性的改变确认外源性RIPK3在细胞内是否具有生物学活性。通过转录组测序技术(RNAseq)从m RNA水平对对照组和实验组基因表达水平的变化进行检测,通过生物医学分析研发软件暨资料库(ingenuity pathway analysis,IPA)对RNAseq数据进行分析,获得重要的下游效应分子及相关信号通路,并对其相关作用分子表达发生的改变进行统计。采用Western blotting对部分实验数据进行验证。【结果】RIPK3表达水平上调后,实验组SH-SY5Y细胞增殖活性受到抑制,IPA分析结果显示:CX3CL1的表达水平出现明显上调;与其相关的部分信号分子也发生了相应的改变。其后Western blotting结果从蛋白水平验证了CX3CL1表达水平的变化。【结论】RIPK3能够在m RNA及蛋白水平上调节CX3CL1表达,并对其相关分子产生影响,进而在神经系统各种生理与病理条件下发挥重要的作用。

• 单位
  中心实验室; 武警后勤学院