与肾小管上皮转分化相关的miRNA的初步筛选

作者：邵驾宇; 章慧娣; 潘嘉林; 尤小寒; 薛向阳; 黄朝兴

来源：浙江医学, 2014, 36(17): 1434-1442.

• 大鼠肾小管上皮细胞
• 肾小管上皮转分化
• 转化生长因子-β1
• microRNA

目的观察miRNA在大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)发生上皮-肌成纤维细胞转分化(EMT)过程中的变化,筛选与肾小管上皮细胞转分化相关的miRNA。方法体外培养NRK-52E,用5 ng/ml转化生长因子-13 1(TGF-13 1)分别作用0、3、6、12、24、48 h,以0 h为空白组(BC组),余为TGF-β1组。倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;real-time PCR法检测细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙蛋白(E-cad)、1型胶原(Col 1)和纤连蛋白(FN)的mRNA表达水平;Western blot法检测细胞内α-SMA的表达水平;ELISA法检测上清液中FN的含量;茎环实时荧光定量PCR法检测6条miRNA在细胞内的表达水平。结果与BC组比较,TGF-β1组部分细胞失去原有的鹅卵石形态,转变成成纤维细胞特有的梭形;细胞内α-SMA、Col I和FN的mRNA表达上调,E-cad的mRNA表达下调,细胞内α-SMA表达量增多,细胞上清液中FN含量升高(均P<0.05);miR-30d、miR-132和miR-21的表达上调,miR-200b、miR-192和miR-10b的表达下调(均P<0.05)。结论 TGF-β1可诱导NRK-52E发生EMT。miR-30d、miR-132、miR-21、miR-200b、miR-192和miR-10b可能参与大鼠肾小管上皮细胞EMT,值得进一步研究。

• 单位
  温州医科大学附属第二医院; 温州医科大学; 温州医科大学附属第一医院