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摘要
真核翻译起始因子4E结合蛋白1 (4E-BP1)是mTOR信号通路下游的翻译抑制因子,调节翻译的起始和蛋白质的合成。为探究中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis) 4E-BP1基因特征、时空表达模式及其在蜕壳过程中的潜在作用本研究利用RACE技术克隆获得中华绒螯蟹Es4E-BP1全长cDNA序列,利用qPCR技术探究其时空表达,利用dsRNA干扰探究其在中华绒螯蟹蜕壳中的作用。测序结果显示,Es4E-BP1 cDNA全长1678 bp,包括134 bp的5非编码区、1193 bp的3’ 非编码区和351 bp的开放阅读框。氨基酸序列分析发现,Es4E-BP1含有1个eIF4E超级家族的典型保守域,且包含1个超二级结构TOS基序和1个YXXXXLΦ基序。多序列比对和系统进化树分析显示Es4E-BP1与蓝蟹(Callinectes sapidus)、三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)聚为一支并且具有很高的同源性(95.69%和93.16%)。qPCR结果显示,Es4E-BP1在成蟹各个组织均有表达,其中Y器官表达量最高,其次为肌肉,鳃丝中表达量最低。一个完整蜕壳周期内,幼蟹不同组织表达模式不同,但均在蜕壳后期A-B期表达量最高,蜕壳前期表达量较低。注射ds Es4E-BP1后,中华绒螯蟹存活率远低于对照组CG组;蜕壳间隔显著高于CG组。研究结果表明,Es4E-BP1在中华绒螯蟹各组织中广泛表达,在调控蜕壳生长中具有重要作用,为进一步研究甲壳动物4E-BP1基因提供了重要参考。
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