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摘要
转录因子c-fos在细胞增殖、分化和肿瘤形成中发挥着重要作用。本研究旨在获得山羊c-fos基因序列并阐明其生物学性质，进一步利用过表达手段揭示c-fos在山羊皮下脂肪细胞分化过程中的调控作用。本试验以简州大耳羊为研究对象，用逆转录PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术克隆获得c-fos基因序列并分析其生物学性质；用实时荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)技术检测c-fos基因在山羊心、肝、脾、肺、肾、皮下脂肪和背最长肌7个组织以及皮下脂肪细胞诱导分化的0-120 h的表达情况；用基因重组方法构建山羊pEGFP-c-fos过表达载体并转染至皮下前体脂肪细胞诱导分化后，用油红O和Bodipy染色从形态学上观察其对脂滴积聚的影响，用qPCR技术在mRNA水平上检测过表达c-fos对成脂分化标志基因的影响。结果表明，克隆的山羊c-fos基因长1 477 bp[编码区(coding sequence,CDS) 1 143 bp]，编码380个氨基酸，亚细胞定位预测该基因主要分布于细胞核中；表达蛋白具有一个碱性亮氨酸拉链结构；c-fos基因在山羊皮下脂肪组织相对表达水平较高(P<0.05)，在皮下前体脂肪细胞诱导分化后48 h的相对表达水平最高(P<0.01)；过表达c-fos可抑制山羊皮下脂肪细胞的脂滴形成，并极显著降低成脂标志基因AP2和C/EBPβ的相对表达水平(P<0.01)，且启动子结合位点预测存在多个结合位点。综上所述，c-fos是山羊皮下脂肪细胞分化的负调控因子，通过调控AP2和C/EBPβ基因的表达来发挥作用。
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