Wnt经典通路β-catenin过表达对人牙周膜干细胞增殖能力及成骨能力的影响

作者：李影; 刘娜; 张维; 顾斌

来源：中华老年口腔医学杂志, 2017, 15(04): 198-203.

• PDLSCs
• 经典Wnt通路
• β-catenin
• 增殖能力
• 成骨能力

目的:探讨Wnt经典通路β-连环蛋白(β-catenin)过表达对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖能力及成骨能力的影响。方法:收集因治疗需要拔除的健康前磨牙和第三磨牙8颗,分离、培养PDLSCs。通过构建慢病毒过表达载体,转染β-catenin基因使实验组过表达β-catenin。转染后显微镜下观察常规培养及成骨诱导7d后细胞形态;MTT测定转染前后PDLSCs的增殖情况;实时定量PCR技术检测淋巴增强因子-1(LEF1)、T淋巴细胞因子-4(TCF4)、Runt相关转移因子-2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、人Ⅰ型胶原蛋白-1(Colossians 1,COL-1)及P38丝裂原活化蛋白激酶(P38mitogen activated protein kinases,P38 MAPK)mRNA表达。成骨诱导7d后,提取RNA,检测成骨相关基因Runx2、ALP、COL-1、P38 MAPK mRNA表达。结果:转染后细胞表达绿色荧光(green fluorescent protein,GFP)。MTT结果示:β-catenin过表达组PDLSCs增殖能力较空转染组增强。β-catenin过表达组LEF1表达水平显著上升(P<0.05),TCF4表达水平无显著性差异(P>0.05);与空转染组相比β-catenin过表达组成骨诱导7d后Runx2、ALP、COL-1及P38表达水平显著降低(P<0.05)。结论:经典Wnt/β-catenin通路在PDLSCs增殖及成骨分化过程中发挥重要作用,核心蛋白β-catenin过表达可上调LEF1的表达促进PDLSCs的增殖能力,并可通过下调RUNX2、ALP、COL-1、P38的表达抑制其成骨能力。

• 单位
  中国科学院理化技术研究所; 解放军总医院