促红细胞生成素受体干扰RNA慢病毒表达载体的构建及干扰细胞的筛选

作者：呼格吉乐

来源：中华危重症医学杂志(电子版), 2015, 8(06): 347-350.

• 干扰RNA
• 促红细胞生成素受体
• 慢病毒
• 胶质瘤

目的构建人促红细胞生成素受体(EPOR)干扰RNA慢病毒(LV)表达载体,并筛选出EPOR能稳定干扰人脑胶质细胞瘤U251细胞的最佳感染复数(MOI)。方法构建人EPOR干扰RNA慢病毒表达载体,即LV-EPOR,收集病毒,检测病毒滴度后感染人脑胶质细胞瘤U251细胞(LV-EPOR-U251细胞),根据MOI值的不同分为MOI100、MOI10、MOI1组,选出荧光表达量最高的一组,经RT-PCR检测m RNA表达,计算干扰效率。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。经RT-PCR检测结果证实,MOI100组的LV-EPOR-U251细胞荧光表达量最高,其干扰效率为72%。结论成功构建LV-EPOR,LV-EPOR-U251细胞稳定干扰的MOI值为100。

• 单位
  内蒙古医科大学附属医院