科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的探讨Caspase活性和凋亡抑制因子1(CAAP1)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭的影响。方法构建CAAP1的过表达载体pcDNA3/CAAP1和敲降载体pSilencer 2.1-U6 neo/shR-CAAP1(shR-CAAP1),并进行鉴定。SMMC-7721分为4组:pcDNA3/CAAP1组、pcDNA3对照组、shR-CAAP1组和pSilencer对照组。SMMC-7721培养后,将CAAP1的过表达载体pcDNA3/CAAP1(pcDNA3/CAAP1组)和敲降载体shR-CAAP1(shR-CAAP1组)以及它们的对照(pcDNA3对照组、pSilencer对照组)分别转染到SMMC-7721中,48 h后进行后续实验。实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中CAAP1 mRNA的表达水平,Western blot检测CAAP1、cleaved Caspase-3蛋白的表达水平;CCK-8实验检测各组细胞的增殖,细胞集落形成实验比较各组细胞集落形成能力;划痕实验比较各组细胞运动能力,Transwell小室检测各组细胞的迁移和侵袭;流式细胞术检测各组细胞的凋亡。纳入TCGA数据库CAAP1低表达的患者75例、CAAP1高表达的患者295例随访48个月的数据,Kaplan-Meier生存曲线比较不同CAAP1表达水平对肝癌患者总生存(OS)的影响。结果双酶切鉴定表明CAAP1过表达载体pcDNA3/CAAP1和敲降载体shR-CAAP1构建成功;qRT-PCR和Western blot结果提示pcDNA3/CAAP1能够使SMMC-7721细胞中CAAP1 mRNA和蛋白表达水平增加(与pcDNA3对照组相比,P<0.05),而shRCAAP1使CAAP1 mRNA和蛋白表达水平降低(与pSilencer对照组相比,P<0.05)。与pcDNA3对照组比较,pcDNA3/CAAP1组SMMC-7721细胞的增殖能力、克隆形成能力、运动能力、迁移和侵袭能力增加,而细胞的凋亡受到抑制(均P<0.05);与pSilencer对照组相比较,shR-CAAP1组SMMC-7721细胞的增殖能力、克隆形成能力、运动能力、迁移和侵袭能力降低,而细胞凋亡增加(P<0.05)。TCGA数据库分析表明CAAP1低表达时肝癌患者的OS优于CAAP1高表达者。结论 CAAP1能够促进肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭,并抑制其凋亡。
-
单位基础医学院; 华北理工大学
