HPV E7与子宫颈上皮内瘤样病变细胞DNA损伤应答的相关性研究

作者：曹寒雨; 王小军; 唐子执; 楼江燕

来源：四川大学学报（医学版）, 2016, 47(06): 837-842.

DOI：10.13464/j.scuxbyxb.2016.06.004

• E7
• 原代细胞培养
• DNA损伤

目的通过原代培养HPV阳性的宫颈上皮内瘤变Ⅲ度(CINⅢ)的成纤维细胞与HPV阴性的小儿包皮成纤维细胞,探索HPV E7在DNA损伤应答过程中的作用。方法选取临床病理确认为HPV16阳性的CINⅢ新鲜宫颈组织和HPV16阴性的小儿包皮组织,组织块经胶原酶A消化后培养,用慢病毒E7或pLV感染HPV16-成纤维细胞,用离子射线(X光,2Gy或5Gy)分别照射HPV16阴性与HPV16阳性细胞以及经pLV或E7慢病毒感染的细胞08h,诱导细胞DNA双链断裂,采用间接免疫荧光法检测DNA双链断裂应答相关蛋白53BP1、BRCA1、NBS1、RPA32的应答特征。结果成功从宫颈上皮内瘤变组织及小儿包皮组织原代培养出HPV16阳性及HPV16阴性的成纤维细胞。间接免疫荧光染色发现X光照射后,HPV16阳性细胞中53BP1、BRCA1、NBS1、RPA32灶点多于HPV16阴性细胞(P<0.05),E7感染细胞中53BP1、RPA32、NBS1灶点少于pLV感染细胞(P<0.05),均为6h(2Gy)或4h(5Gy)达峰。结论利用原代培养CIN成纤维细胞成功建立了研究DNA损伤中E7作用的模型,在宫颈癌前病变发展过程中,HPV E7能够抑制DNA双链断裂修复应答反应。

• 单位
  四川大学华西第二医院; 四川大学