人羊膜间充质干细胞原代培养及向心肌样细胞分化

作者：杨曲; 张卫芳; 陈祺; 胡锋; 李娟; 罗军^*

来源：临床与实验病理学杂志, 2022, 38(05): 513-519.

DOI：10.13315/j.cnki.cjcep.2022.05.001

• 羊膜间充质干细胞
• 原代培养
• 诱导分化
• 心肌样细胞

目的 探讨原代人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells, hAMSCs)体外分离培养的方法及向心肌样细胞分化的能力。方法 收集人正常足月顺产或剖宫产后胎盘羊膜，采用机械-酶消化法分离培养hAMSCs,观察其形态学特点。取第3代hAMSCs,通过诱导成骨、成脂分化和流式细胞术检测鉴定其干细胞特性，体内接种法和体外软琼脂克隆法检测其致瘤性。应用5-aza、TGF-β1及Ang-Ⅱ诱导其向心肌样细胞分化(实验组),镜下观察细胞形态学变化；qRT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光法分别检测心肌细胞标志基因cTnI、ACTN2、NKX2.5及其蛋白的表达；CCK-8实验检测细胞活性；淋巴细胞增殖实验检测细胞免疫原性。结果 分离纯化后的hAMSCs呈梭形，漩涡状生长，可成功诱导向成骨、成脂分化；流式细胞术结果显示hAMSCs高表达CD44、CD90,低表达CD45,不表达HLA-DR;体内外实验未显示致瘤性。诱导hAMSCs向心肌样细胞分化后，细胞呈棒状或长梭形，胞间见细丝样连接结构，与对照组相比，实验组中cTnI、ACTN2、NKX2.5基因及其蛋白水平明显升高，且保持良好的细胞活性及低免疫原性，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 hAMSCs可在体外分离培养且能够被诱导向心肌样细胞分化，为心肌疾病的再生修复治疗提供了新的种子细胞。

• 单位
  南昌大学第二附属医院