人用狂犬病疫苗（Vero细胞）宿主残余DNA qPCR检测方法的建立及验证

作者：刘利强; 包小华; 周慧明; 曾智; 刘建华; 张海平; 迟宝琦; 汪树生^*; 刘大维^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(06): 707-713.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003922

• 人用狂犬病疫苗
• Vero细胞
• 残余DNA
• 实时荧光定量聚合酶链反应

目的 建立能够进行定性及定量分析的人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液宿主残余DNA检测的qPCR法，并进行验证。方法 用Vero细胞DNA定量国家标准品建立qPCR标准曲线，磁珠法提取Vero细胞残余DNA。对该方法进行专属性、重复性、中间精密度、准确度及耐用性验证，并确立线性范围及定量限。用该方法对3批人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液残余DNA进行定量分析及片段大小定性分析。结果 采用qPCR法检测Vero细胞DNA定量国家标准品，标准曲线相关系数(R2)均> 0.99,DNA检测范围为0.3 pg/mL～30 ng/mL。该方法专属性、重复性好，中间精密度、准确度及耐用性验证中，样品检测结果的相对标准偏差(RSD)均<10%。3批原液Vero细胞残余DNA含量为0.20～0.77 ng/剂，符合《中国药典》三部(2020版)相关标准；残余DNA>154 bp的片段占52%～63%。结论 建立的方法专属性、重复性、中间精密度、耐用性好，可快速、准确地进行残余DNA的定性及定量分析，对人用狂犬病疫苗(Vero细胞)生产过程中和最终产品残余DNA含量的检测及控制具有重要意义。

• 单位
  吉林农业大学