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摘要
目的紧密连接蛋白3(CLDN3)表达风度与卵巢癌恶性进展有一定的正相关性,但其机制不明。本研究旨意探究CLDN3新的翻译后修饰——棕榈酰修饰对其调控卵巢癌恶性进展的影响。方法在代谢生物正交实验中,利用棕榈酰代谢标记物,通过点击化学反应,考察CLDN3是否存在S-棕榈酰化修饰,并明确其修饰的半胱氨酸位点。在建立稳定表达模型体系下,利用Western印迹法检测野生型和棕榈酰化修饰缺失型CLDN3的蛋白半衰期。利用免疫荧光技术,考察野生型和棕榈酰化修饰缺失型CLDN3在细胞内定位的改变。利用体外平板克隆形成实验,考察不同程度棕榈酰化缺失型CLDN3对卵巢癌细胞增殖的影响。利用免疫共沉淀技术结合代谢生物正交实验,探寻潜在将CLDN3作为底物的棕榈酰基转移酶。结果 CLDN3多个半胱氨酸位点发生棕榈酰化修饰。棕榈酰化修饰缺失型CLDN3蛋白稳定性明显低于野生型CLDN3,在细胞膜的定位也显著降低,更多分布于细胞质中。棕榈酰化修饰缺失后,CLDN3促进卵巢癌细胞克隆形成能力明显减弱。棕榈酰基转移酶z DHHC12负责CLDN3的棕榈酰化修饰。结论棕榈酰化修饰影响CLDN3蛋白稳定性并促进其细胞膜定位,从而对CLDN3调控卵巢癌恶性进展具有一定的促进作用。
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