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摘要
目的建立一种快速、准确检测牛肉中大肠杆菌O157∶H7的方法。方法利用抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体2G5(捕获抗体),酶标单克隆抗体2E3(HRP-2E3,检测抗体),建立可用于检测大肠杆菌O157∶H7的双抗体夹心ELISA方法,同时对反应条件进行优化并对该方法进行评价。结果通过优化得到最佳反应条件,单克隆抗体2G5最佳包被浓度为4.48μg/mL,HRP-2E3最佳检测浓度为19.9μg/mL。该方法对纯培养菌液最低检出限为1×105 CFU/mL,具有良好的敏感性,且特异性良好,与其他大肠杆菌、沙门氏菌、李斯特菌等均无交叉反应。板内及板间变异系数均小于7%,具有较高的精密度。人工污染牛肉样品增菌8 h后,对大肠杆菌O157∶H7的检出限为1 CFU/25 g。结论建立的双抗体夹心ELISA检测方法灵敏度、准确度、重复性良好,特异性强,可用于临床实际样品检测。
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