蛋白磷酸酶1调节亚基14B对神经母细胞瘤细胞有丝分裂进程的调控作用

作者：简肖肖; 张万鹏; 常艳; 张学敏; 李慧艳; 胡怀斌

来源：中国药理学与毒理学杂志, 2022, 1-7.

• 蛋白磷酸酶1调节亚基14B
• 神经母细胞瘤
• 有丝分裂

目的 研究蛋白磷酸酶1调节亚基14B(PPP1R14B)对神经母细胞瘤细胞有丝分裂进程的调控作用，分析PPP1R14B在神经母细胞瘤临床样本中的表达水平及其与预后相关性，为其治疗提供潜在新靶标。方法 在神经母细胞瘤细胞系SK-N-BE(2)-M17中转染2条不同序列siRNA敲低PPP1R14B，利用Time-lapse活细胞成像技术，动态监测敲低PPP1R14B对该细胞有丝分裂进程的影响，RT-qPCR和Western印迹法检测PPP1R14B的敲低效果；采用酶切克隆方法构建靶向PPP1R14B的2条不同序列shRNA慢病毒质粒，并感染SK-N-BE(2)-M17细胞建立PPP1R14B稳定敲低细胞株，Western印迹法检测其敲低效果；克隆形成实验观察敲低PPP1R14B对SK-N-BE(2)-M17细胞生长的影响；基于GEO数据库的临床数据，按照神经母细胞瘤不同临床分期分组，分析在各组样本中PPP1R14B mRNA表达水平及与预后的相关性。结果 Time-lapse活细胞成像结果显示，与转染对照siRNA的SK-N-BE(2)-M17细胞相比，转染PPP1R14B siRNA的2组SK-N-BE(2)-M17细胞有丝分裂期时间延长（P<0.05），且主要是有丝分裂前中期时间显著延长（P<0.01）；经Western印迹法验证，与转染对照shRNA的SK-N-BE(2)-M17细胞相比，2组转染PPP1R14B shRNA的SK-N-BE(2)-M17细胞中的PPP1R14B蛋白质水平明显降低（P<0.01），表明PPP1R14B稳定敲低细胞株构建成功；克隆形成实验表明，与转染对照shRNA组细胞相比，PPP1R14B稳定敲低组的细胞克隆形成数明显降低（P<0.01）;GEO数据库分析显示，PPP1R14B mRNA表达水平与神经母细胞瘤恶性程度呈正相关，与患者预后呈负相关。结论 敲低PPP1R14B导致神经母细胞瘤细胞系有丝分裂期阻滞和生长减慢；结合数据库分析提示，PPP1R14B在神经母细胞瘤的发生发展中发挥重要功能。

• 单位
  首都医科大学附属北京儿童医院