基于Cre-LoxP系统构建一种新的时间特异性突变NLRP3转基因小鼠模型

作者：杨熙玥; 周永婷; 叶菜英; 朱蕾^*

来源：中国药理学通报, 2023, 39(03): 594-598.

• NLRP3突变
• Cre-LoxP系统
• 转基因小鼠
• 时间特异性
• 基因型鉴定
• 表型鉴定

目的 应用Cre-LoxP系统构建一种新的时间特异性NLRP3点突变转基因小鼠模型并对其进行鉴定。方法 利用Cre-LoxP技术，构建NLRP3基因T346M点突变的flox杂合子(NLRP3flox/+)小鼠。将该小鼠与广谱表达Cre重组酶工具鼠(CAG-Cre/ERT2,CreT)杂交繁育，获得基因型NLRP3flox/+CreT+/-小鼠，后者与NLRP3T346M的flox纯合子(NLRP3flox/flox)小鼠进一步交配获得NLRP3flox/floxCreT+/-(KI/KI)和NLRP3flox/+CreT+/-(KI/WT)小鼠，于6～8周时经他莫昔芬的诱导实现NLRP3T346M突变基因的时间特异性敲入。小鼠繁育和鉴定过程中，用PCR方法检测鼠尾基因组DNA。采用Western blot法检测小鼠肝脏和心脏中NLRP3、pro-Caspase-1和Caspase-1的蛋白质表达水平。结果 小鼠给予他莫昔芬后，NLRP3T346M突变基因被诱导敲入。Western blot结果显示，KI/KI小鼠肝脏和心脏组织以及KI/WT小鼠心脏中NLRP3炎性小体效应蛋白Caspase-1的表达水平较同窝野生型小鼠显著上调。结论 本研究基于Cre-LoxP技术成功构建了NLRP3T346M突变转基因小鼠模型，该模型小鼠在他莫昔芬诱导后可出现自发性的NLRP3炎症小体活化，这为探究NLRP3炎症小体活化机制以及筛选和评价NLRP3炎症小体抑制剂提供了新的时间特异性的实验动物模型。

• 单位
  北京协和医学院; 中国医学科学院基础医学研究所