金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白PBPX基因的克隆与表达

作者：李文通; 盛佩群; 羊晓敏; 陈逸璐; 何文迪; 夏佳音; 陈新江^*

来源：生物技术, 2018, 28(05): 425-454.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2018.05.0074

• 金黄色葡萄球菌
• 青霉素结合蛋白
• 药物靶点
• 克隆
• 表达

[目的]对金黄色葡萄球菌一种新的青霉素结合蛋白(PBPX)进行原核表达,为新型抗菌药物设计提供参考数据。[方法]将ATCC25923基因组数据通过Blast进行比对,从中发现了一个含有PBP保守结构域的基因序列,命名为PBPX。PCR扩增PBPX基因,将扩增产物酶切后与原核表达载体p ET-32a(+)连接,构建表达PBPX的重组质粒,将该重组质粒转化大肠杆菌TG1内,增菌培养后提取质粒,经PCR、双酶切鉴定后,再转化大肠杆菌BL21(DE3),对转化菌株诱导后进行10%SDS-PAGE分析。[结果]构建了表达载体p ET-32a(+)-PBPX,在37℃经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得表达,重组青霉素结合蛋白分子量为52. 2 k Da。[结论]PBPX基因成功克隆到表达载体内并获得了表达。

• 单位
  宁波卫生职业技术学院; 浙江医药高等专科学校