Flt3配体胞外域的原核表达纯化及活性鉴定

作者：刘强; 郑瑾; 赵星成; 刘利; 郝淼旺; 陈任安; 韩骅; 梁英民

来源：现代生物医学进展, 2010, (21): 4001-4003+4011.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2010.21.001

• Flt3配体
• 原核表达
• 蛋白纯化
• 造血干/祖细胞扩增 Flt3 ligand
• Prokaryotic expression
• Protein purification
• Hematopoietic stem/progenitor cells amplification.

目的:构建pET32a( )-hFLext原核表达载体,诱导hFLext蛋白表达、纯化及活性鉴定。方法:以人淋巴细胞cDNA文库为模板,克隆hFLext,构建pET32a( )-hFLext重组表达载体。转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白,SDS-PAGE及Western blot鉴定。细胞增殖实验检测其生物学活性。结果:成功克隆获得hFLext,并构建了pET32a( )-hFLext重组表达载体。在大肠杆菌BL21,经1mMIPTG30℃诱导12h,成功表达Trx-hFLext融合蛋白,主要以包涵体形式存在。经8M尿素变性包涵体蛋白,逐步透析复性,镍珠亲合层析...

• 单位
  第四军医大学