巨噬细胞雄激素受体通过调控白细胞介素1β基因表达影响高磷诱发的血管平滑肌细胞钙化

作者：庞海燕; 卢志; 肖龙飞; 陈海燕; 尚芝群; 蒋宁; 王晓娟; 魏芳; 姜埃利; 王林; 牛远杰^*

来源：中华肾脏病杂志, 2022, 38(05): 420-427.

• 受体, 雄激素
• 巨噬细胞
• 肌细胞, 平滑肌
• 白细胞介素1β
• 炎症

目的探讨巨噬细胞雄激素受体(androgen receptor, AR)是否通过调控白细胞介素(interleukin, IL)-1β基因表达影响高磷诱发的血管平滑肌细胞钙化。方法采用人单核细胞系THP-1细胞, 利用染色质免疫沉淀实验检测AR是否与IL-1β启动子的雄激素受体元件(androgen receptor element, ARE)序列结合, 通过荧光素酶分析实验检测AR是否调控IL-1β基因表达。基因沉默THP-1细胞的AR, 用携带载体或shRNA的慢病毒转染THP-1细胞, 流式细胞术分选出带荧光标记的阳性转染细胞THP-1ARsc(对照组)和THP-1ARsi(沉默单核细胞AR), Western印迹法检测THP-1ARsc、THP-1ARsi细胞的AR表达水平, 通过佛波酯(50 ng/ml)诱导获得巨噬细胞MФARsc(对照组)或MФARsi(沉默巨噬细胞AR), 酶联免疫吸附试验检测MФARsc或MФARsi条件培养基的IL-1β表达水平。用MФARsc或MФARsi的条件培养基加入磷酸盐(磷酸二氢钠, 终浓度2.5 mmol/L)后对人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells, HASMC)进行培养, 茜素红S染色分析HASMC的钙化情况, Western印迹法检测成骨细胞标志物RUNX2和HASMC标志物SM22α的表达水平;中和实验分析IL-1β介导巨噬细胞AR对HASMC钙化的影响。结果 AR与IL-1β启动子的ARE序列结合并调控IL-1β基因表达。与MФARsc细胞比较, MФARsi细胞条件培养基的IL-1β蛋白表达水平显著下降(P<0.001)。与MФARsc条件培养基比较, MФARsi条件培养基HASMC钙沉积显著减少, RUNX2蛋白表达下降而SM22α蛋白表达增多(均P<0.05);MФARsi条件培养基+IgG抗体组较MФARsc条件培养基+IgG抗体组HASMC钙化显著抑制, MФARsc条件培养基+IL-1β抗体组较MФARsc条件培养基+IgG抗体组HASMC钙化显著抑制, 而MФARsi条件培养基+IgG抗体组和MФARsi条件培养基+IL-1β抗体组均较MФARsc条件培养基+IL-1β抗体组HASMC钙化抑制程度更大(均P<0.05)。结论巨噬细胞AR通过与IL-1β启动子内的ARE序列结合调控IL-1β的表达, IL-1β介导巨噬细胞AR对高磷诱发HASMC钙化的影响。

• 单位
  天津医科大学第二医院