结合区部分缺失的纤维素酶基因的克隆与表达及酶学性质初步测定

作者：还萍; 李锐; 李华南; 江正兵; 马向东^*

来源：湖北大学学报(自然科学版), 2019, 41(05): 477-482.

• 内切纤维素酶
• 异源表达
• 结合区
• 酶学性质

从梧桐腐枝上分离到一株可降解纤维素的细菌菌株,发现克隆于该菌株的内切纤维素酶基因(egt)结合区部分缺失(8 bp),导致移码并提前终止,全长1 146 bp,编码381个氨基酸,分子量为40. 06 k D.克隆含有完整结合区的基因(eg),通过酶学性质研究,表明两者均仅具有羧甲基纤维素钠活性,纤维素酶EGT和EG的最适反应温度分别为45℃和55℃,EGT更加耐高温.最适pH均为7. 0,都具有较好的pH稳定性.Mn2+、Fe2+对两者具有激活作用,Zn2+、Ca2+、K+、NH42+和Mn2+对其都具有抑制作用.EGT的Km=3. 09 mg/mL,比酶活为98. 4 U/mg; EG的Km=8. 654 mg/mL,比酶活为53. 53 U/mg. EGT结合区的部分缺失导致酶与底物的亲和能力更好,同时比酶活提高183%,水解能力更强.

• 单位
  生命科学学院; 湖北大学