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摘要
目的 对弓形虫缓殖子期抗原1(BAG1)基因进行优化、克隆、原核表达，表达产物纯化后免疫小鼠，制备BAG1多克隆抗体，评价重组蛋白的免疫原性，并观察BAG1在虫体内的定位。方法 对bag1基因序列进行筛选和优化，利用生物信息学方法分析其编码蛋白的氨基酸序列结构和功能，预测其免疫原性。将合成的pET28a(+)-bag1质粒转化至BL21感受态细胞中，加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)至终浓度l mmol/L,37℃诱导4 h,用HIS标签蛋白纯化试剂盒纯化表达蛋白。取纯化蛋白做SDS-PAGE凝胶电泳分析，用BCA法测定蛋白浓度。取7只BALB/c小鼠，取纯化的BAG1蛋白与等体积的弗氏佐剂按双推法混匀，皮下多点注射免疫小鼠，每鼠每次注射蛋白25μg(第一次使用弗氏完全佐剂，后两次均使用弗氏不完全佐剂，每隔两周免疫一次),末次免疫4 d后摘眼球取血，分离血清，以此为一抗，采用Western blot检测碱性条件下我国流行优势基因型Chinese 1虫株(TgCtwh6)速殖子向缓殖子转化及含有TgCtwh6包囊小鼠脑组织中的BAG1蛋白，间接免疫荧光(IFA)试验检测TgCtwh6虫株碱性诱导成为缓殖子情况。结果 预测BAG1含有7个潜在抗原表位，具有良好的免疫原性。Western blot显示，BAG1多克隆抗体能识别在体外碱性培养基诱导的TgCtwh6和小鼠脑组织内形成的TgCtwh6虫株缓殖子；IFA结果显示，BAG1多克隆抗体能识别体外诱导的TgCtwh6缓殖子，且BAG1蛋白主要定位在弓形虫的胞质中。结论 成功制备弓形虫BAG1多克隆抗体，该抗体能识别我国优势流行虫株的BAG1蛋白及缓殖子，为我国流行虫株的监测和鉴定提供了良好的手段。
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单位公共卫生学院; 安徽医科大学; 第一临床医学院
