磷酸化标签方法检测异染色质蛋白1αDNA损伤后蛋白磷酸化状态

作者：刘佳; 周光前; 尹献辉; 李雪芹; 王优雅; 胡静仪; 王子梅

来源：华西医学, 2012, (06): 828-831.

• 蛋白质磷酸化
• 磷酸化标签
• 异染色质蛋白1α
• DNA损伤 Protein phosphorylation
• Phos-tag
• Heterochromatin protein-1α
• DNA damage

目的通过检测异染色质蛋白1α(HP1α)在DNA损伤后的磷酸化状况,介绍一种用磷酸化标签(phos-tag)试剂检测磷酸化蛋白质的新方法。方法取雄雌C57小鼠交配后孕13.5 d胚胎,分离并原代培养小鼠胚胎成纤维细胞。对照组及实验组(6个损伤时间点)各取2个100 mm培养皿的细胞进行实验,实验组细胞用喜树碱进行DNA损伤;对照组用等量的二甲基亚砜处理。用掺入phos-tag的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白并转印,将膜用抗HP1α的抗体孵育,用偶联辣根过氧化物酶的抗体做二抗,通过成像系统检测蛋白。结果实验组存在一条与HP1α有明显不同迁移率的磷酸化HP1α条带,与对照组相比DNA损...

• 单位
  四川大学华西医院; 深圳大学; 生物治疗国家重点实验室