CCK-8与MTT法检测左归丸含药血清干预BMSCs增殖条件的比较

作者：刘飞祥; 谭峰^*; 樊巧玲^*; 李星; 叶素敏; 张明玥; 柴毅; 麦聪英; 吴丹

来源：中国骨质疏松杂志, 2022, 28(01): 6-10.

• CCK-8法
• MTT法
• 骨髓间充质干细胞
• 左归丸

目的探讨CCK-8与MTT法在检测左归丸含药血清干预大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖时所需的最佳实验条件,并比较两种方法的优缺点。方法用左归丸含药血清进行干预P3 BMSCs,孵育结束后,分别加入CCK-8与MTT试剂,检测两种方法的最佳波长、培养时间、灵敏度和增殖时间。结果CCK-8法与MTT法检测BMSCs的最佳波长分别为450 nm和550 nm,孵育时间分别为3 h和4 h,细胞接种密度分别为0.1×104/孔和0.25×104/孔。CCK-8法与MTT法在BMSCs接种密度分别高于0.25×104/孔和0.5×104/孔时,两种方法检测所得OD值均提早进入平台期,易出现假S型增长曲线。而当密度分别低于0.05×104/孔和0.1×104/孔时,细胞增加缓慢,难以形成S型增长曲线,不能反映出BMSCs的增殖特性。与CCK-8法相比较,在细胞密度低于0.1×104/孔或高于2×104/孔时,MTT法对BMSCs在翻倍时OD值增加的响应量无明显变化,差异无统计学意义。而细胞密度为0.25×104/孔至1×104/孔时,MTT法对BMSCs在翻倍时OD值增加的响应量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MTT法更适用于左归丸含药血清干预BMSCs增殖和分化的研究。

• 单位
  南京中医药大学