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摘要
【目的】本研究旨在对云南半细毛羊精子冷冻前后差异表达的基因与精子冷冻损伤的关系进行研究。【方法】采用电刺激法采集3只云南半细毛羊精液，各分成2份，一份直接用于提取精子RNA,另一份经过冷冻保存7 d后再进行精子RNA提取。利用获得的精子RNA,采用单细胞转录组测序技术分别检测新鲜精子和冻融精子的mRNA转录组，构建mRNA转录组文库，用Hiseq2500测序仪进行测序，对测序结果做进一步过滤处理，然后对差异表达基因进行GO功能注释和KEGG通路分析。【结果】6份精液样本共产生623 399 754条原始测序序列，过滤处理后得到514 313 802条(82.50%)高质量的Clean reads。生物信息学分析结果表明，冷冻前后差异表达显著的基因共1 213个。其中，解冻后表达量下调的有1 208个，上调的有5个。通过GO功能注释和KEGG通路富集分析，差异表达基因分别归类于56个GO分类，参与40个信号通路。其中与精子功能密切相关的主要包括精子细胞过程、代谢过程、应激反应、生殖、质膜和氧化还原反应；精子冷冻前后差异表达基因参与的信号通路主要有炎症、细胞因子-细胞因子受体相互作用和细胞凋亡等通路。【结论】云南半细毛羊精子的冷冻损伤可能与获得的差异表达基因参与的生物过程有关。此外，获得的差异表达基因也可作为分子标记物应用于绵羊冻精品质的评价。
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