单管可视化环介导等温扩增技术快速检测恶性疟原虫

作者：江再茂; 马雪萍; 殷竹君; 陆妍; 曹晓梅; 武海萍

来源：现代生物医学进展, 2014, 14(26): 5014-5018.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2014.26.004

• 恶性疟原虫
• 环介导等温扩增
• 闭管反应

目的:建立一种基于环介导等温核酸扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP)的恶性疟原虫高灵敏可视化闭管检测方法。方法:针对恶性疟原虫核糖体DNA的序列保守区设计LAMP引物,通过优化LAMP体系中的Mg2+、甜菜碱浓度和反应温度等因素,建立环介导等温扩增法;并结合蜡封反应管对产物进行检测,检测结果可直接通过肉眼观察SYBR Green I荧光显色进行判定。结果:本方法可检测到70个拷贝/管的恶性疟原虫核酸片段,并具有高特异性,可区分检测常见的血液病毒。该法具有如下优点:1、整个反应恒温进行,无需热循环仪;2、闭管检测,极大降低了扩增产物交叉污染的风险;3、检测速度快,整个检测过程只需30 min。结论:该法的建立为恶性疟原虫的现场快速筛检提供了一种简便、高灵敏、高特异的工具。

• 单位
  南京军区南京总医院; 中国人民解放军第171医院; 中国人民解放军南京军区军事医学研究所