人脂肪间充质干细胞条件培养基冻干粉促进皮肤成纤维细胞迁移、细胞外基质合成和抑制巨噬细胞炎症

作者：陈应炉; 宋晓乐; 雷继刚; 任程洁; 戴成祥^*

来源：中国医药生物技术, 2020, 15(05): 460-468.

• 人脂肪间充质干细胞
• 条件培养基冻干粉
• 细胞因子
• 再生医学

目的探讨人脂肪间充质干细胞条件培养基冻干粉(hADMSCs-CMLP)对成纤维细胞(HFF-1)迁移、细胞外基质合成水平的影响,以及对小鼠巨噬细胞(Raw264.7)炎症因子释放的影响。方法收集人脂肪间充质干细胞P3代细胞条件培养基上清液,经冷冻干燥后,获得冻干粉制剂。使用前用去离子水溶解,添加到人成纤维细胞HFF-1和小鼠巨噬细胞Raw264.7培养基中。用细胞划痕实验筛选冻干粉的浓度,用活细胞工作站和transwell方法检测人成纤维细胞迁移和细胞增殖情况;q RT-PCR法检测成纤维细胞细胞外基质蛋白纤维粘连蛋白、弹性蛋白、I型胶原蛋白、MMP-1的m RNA水平变化;ELISA法测定巨噬细胞Raw264.7炎症因子TNF-α、IL-6释放情况。结果分离传代培养后,得到的P3代hADMSCs呈长梭形漩涡状并贴壁生长,有立体感,其间充质干细胞表面标志性抗原CD73、CD90、CD105阳性表达率均大于95.00%,CD34、CD45、HLA-DR均小于2.00%;诱导培养21～28d后出现明显的成脂、成骨和成软骨细胞特性;细胞划痕实验显示50%的hADMSCs条件培养基冻干粉对成纤维细胞划痕修复效果最好。HFF-1细胞与hADMSCs条件培养基冻干粉共培养24h,HFF-1细胞迁移率增加了近4倍(P <0.001);q RT-PCR结果显示,hADMSCs条件培养基冻干粉共培养处理48h,HFF-1细胞纤维粘连蛋白、弹性蛋白、I型胶原蛋白基因表达相对于对照组分别上调了2.07倍(P <0.001)、3.92倍(P <0.001)和2.37倍(P <0.001),MMP-1基因表达水平显著降低了2.98倍(P<0.001);hADMSCs条件培养基冻干粉与LPS刺激的小鼠巨噬细胞(Raw264.7)共孵育24 h,与LPS组相比,TNF-α下降了20.7%(P <0.01),IL-6下降了83.9%(P <0.001)。结论 hADMSCs条件培养基冻干粉能够显著促进成纤维细胞迁移,同时促进成纤维细胞的纤维粘连蛋白、弹性蛋白、I型胶原蛋白转录水平升高;hADMSCs条件培养基冻干粉还能显著抑制TNF-α和IL-6炎性因子的分泌。因此,hADMSCs条件培养基冻干粉在创伤修复、组织工程和美容抗衰领域具有一定应用潜力。