恶性疟原虫自噬相关蛋白8基因原核重组表达及多克隆抗体制备

作者：李缜; 邹洋; 黄敏君; 贾永根; 闫爱霞; 李晶晶^*; 谷俊朝^*

来源：中国热带医学, 2019, 19(05): 411-429.

DOI：10.13604/j.cnki.46-1064/r.2019.05.02

• 恶性疟原虫
• 自噬相关蛋白8
• 原核表达
• 多克隆抗体

目的通过pET-41 Ek/LIC载体在大肠杆菌工程菌中重组表达恶性疟原虫自噬相关蛋白8(PfAtg8)基因的重组蛋白GST-PfAtg8-6×His,并用蛋白免疫法制备小鼠抗自噬相关蛋白8(PfAtg8)的多克隆抗体,并验证其效价。方法体外培养恶性疟原虫3D7株,并提取DNA,PCR扩增PfAtg8序列全长,与pET-41 Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠杆菌RosettaTM(DE3)PLysS工程菌中诱导表达重组蛋白GST-PfAtg8-6×His,蛋白免疫法制备鼠抗PfAtg8的多克隆抗体并用Western blots和酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)进行效价验证。结果 PCR扩增PfAtg8基因并插入pET-41 Ek/LIC载体,转化入大肠杆菌。诱导表达并纯化重组蛋白,进而利用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,经验证该抗体可对重组蛋白进行特异性识别,且效价可达1∶100 000。结论成功表达、纯化了GST-PfAtg8-6×His重组蛋白,并免疫小鼠获得多克隆抗体血清。

• 单位
  首都医科大学附属北京友谊医院; 北京热带医学研究所